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ELISA实验失败,解决方案

时间:2023-05-09 10:13:24 浏览:117

1. 试剂盒因素

试剂应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便的试剂。

不同厂家的试剂一定不能混用,包括底物和洗涤液。由于校准标准有差异,还有抗体、检测方法、试剂、交叉反应等因素都会导致对样本的检测结果不一致。如:有的厂家酶标板孔间CV值大于20%,标记酶的活性及显色液的稳定性比较差,使用劣质的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。

要注意试剂的批号和出厂日期,虽然试剂的有效期多为1年,最好选择刚出厂的试剂盒。

要注意试剂盒的保存条件,一定要按试剂盒规定的要求保存。

要注意实验的操作要符合试剂盒说明书的规定,实验前要详细阅读说明书


2.标本因素和操作因素

血清是最常用的ELISA标本,血浆一般可视为与血清同等的标本,标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致,分为内源性物质和外源性物质两种: 

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内源性物质

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有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质,可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。 

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外源性物质

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    外源性物质常常是由于用于ELISA测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集不全和采血管中添加物等影响。

    所以,当ELISA测定结果与预期或文献报导中不一致时,应该首先考虑试剂因素,这个是做好实验获得正确数据的前提保证,其次还有标本因素和操作因素等多方面进行分析,并应采取相应措施排除干扰作用,从而为实验提供正确可靠的检测结果。

    

 


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